Новые методы повышают специфичность инструментов геномного редактирования CRISPR/Cas9
Исследователи из Гарвардской медицинской школы и Массачусетской больницы общего профиля разработали две стратегии для преодоления частых побочных мутаций (off-target) при редактировании генома CRISPR/Cas9. Методы значительно повышают специфичность РНК-направленных нуклеаз к целевой области ДНК.
Работа описана в специальном выпуске журнала Human Gene Therapy, посвящённом редактированию генома, под руководством приглашённого редактора Фэна Чжана.
Предложенные стратегии:
- Использование укороченных направляющих РНК (gRNAs), которые создают более короткие сайты связывания с целевой ДНК.
- Добавление домена FokI к белку Cas9, что приводит к образованию димерной нуклеазы (РНК-направленная нуклеаза FokI-dCas9, или RFN) вместо мономерной.
Успешное применение этих методов для модификации клеток человеческого рака и эмбриональных стволовых клеток подтвердило их высокую специфичность.