Микроскопия люминесцентная

Метод исследования первично- или вторично-флюоресцирующих объектов с использованием специального люминесцентного микроскопа (например, модели МЛ‑2) или люминесцентной приставки к обычному световому микроскопу (например, моделей ОИ‑28, ОИ‑30).

В микробиологических исследованиях в качестве объектов для люминесцентной микроскопии обычно используют:

После обработки объектов специальными красителями — флюорохромами — и возбуждения свечения ультрафиолетовым светом от ртутно-кварцевых ламп, объект начинает люминесцировать. Цвет свечения зависит как от применённого флюорохрома, так и от химических веществ, входящих в состав самого объекта. Микроорганизмы или структуры инфицированных клеток при таком исследовании выглядят ярко светящимися, что позволяет легко отличить их от несветящегося фона.

Преимущества метода перед обычной световой микроскопией:

  • Более высокая разрешающая способность.
  • Высокая скорость выявления микроорганизмов, что обусловило широкое использование метода для экспресс-диагностики инфекционных заболеваний.

Для повышения специфичности и чувствительности метода микроорганизмы и другие объекты антигенной природы обрабатывают специфическими антисыворотками, к которым присоединены (конъюгированы) флюорохромы. Чаще всего используют:

  • Изотиоцианат флюоресцеина — даёт зелёное свечение.
  • Сульфохлорид лиссамин-родамина В‑200 — флюоресцирует оранжево-красным светом.

Этот вариант метода известен как иммунофлюоресцентный метод (см. соответствующую статью).

Современный контекст

Люминесцентная (флуоресцентная) микроскопия остаётся одним из ключевых методов в биомедицинских исследованиях, однако претерпела значительное развитие. Современные флуоресцентные микроскопы, включая конфокальные и многофотонные системы, обеспечивают трёхмерную визуализацию с высоким разрешением. Появилось огромное количество новых, более стабильных и ярких флуорофоров, включая квантовые точки и флуоресцентные белки (например, зелёный флуоресцентный белок — GFP). Широкое распространение получили методы иммунофлуоресценции с использованием моноклональных антител, что значительно повысило специфичность окрашивания. Метод активно используется не только в диагностике, но и в фундаментальных исследованиях для изучения динамики внутриклеточных процессов в реальном времени.