Крашение (окраска) микробов

Крашение (окраска) микробов — это физико-химический процесс взаимодействия красителя (см. Красители) с химическими группами объектов, целью которого является искусственное придание определённой окраски. Этот метод широко используется в микробиологической практике для определения:

формы,
размеров,
структуры,
локализации,
взаимного расположения микроорганизмов.

Без окрашивания большинство микробов (кроме грибов) не видны в световом микроскопе из-за их малой контрастности.

Классификация методов окрашивания

Способы окрашивания разделяют на:

Витальный (прижизненный).
Поствитальный (посмертный, после фиксации).
Негативный (фон окрашивается, а клетка остаётся светлой), который, в свою очередь, может быть как витальным, так и поствитальным.

Витальное окрашивание

Для него применяют слабые водные растворы красителей (0.2 — 0.001%), такие как:

метиленовый синий,
толуидиновый синий,
нейтральный красный,
конго красный.

Раствор добавляют в препарат «висячая» или «придавленная» капля культуры. Этим способом выявляют спирохеты и простейших, определяют подвижность бактерий, а также наблюдают иммунное набухание капсулы. Использование метода требует строгого соблюдения правил асептики для исключения лабораторного заражения.

Поствитальное окрашивание (фиксированных препаратов)

Эти методы делятся на простые и сложные.

Простые способы

На фиксированный препарат наносят красящий раствор (например, фуксин Пфейффера на 1 — 2 минуты или щелочной метиленовый синий на 3 — 5 минут) так, чтобы он полностью покрыл мазок. Затем краситель сливают, препарат промывают струёй воды, встряхивают, высушивают и микроскопируют.

Что позволяет определить: величину, форму, локализацию и взаимное расположение отдельных клеток.
Ограничения: не позволяет установить тонкую структуру микробов и их дифференцированное отношение к красителям.

Сложные (дифференциальные) способы

Эти цели достигаются при применении сложных методов, которые являются основными в бактериологической диагностике:

Дифференцирующий метод Грама (см. Грама метод) — разделяет все бактерии на грамположительные и грамотрицательные.
Выявление кислотоустойчивости по Цилю — Нельсену (см. Циля–Нельсена метод) — для обнаружения микобактерий туберкулёза.
Определение волютиновых (метахроматических) зёрен по Леффлеру (см. Леффлера окраска) или Нейссеру (см. Нейссера метод окраски) — для диагностики дифтерийной палочки.
Дифференцирующий способ Романовского — Гимзы (см. Романовского–Гимзы окраска) — для окраски крови и простейших (малярийного плазмодия).
Негативно-позитивный способ определения капсулы по Гинсу — Бурри.
Выявление спор по Пешкову или Цилю — Нельсену.

Окрашивание различных групп микроорганизмов

Простейшие: чаще всего окрашивают по методу Романовского — Гимзы или гематоксилин-эозином.
Грибы: исследуют как неокрашенными (нативный препарат), так и с помощью методов Грама, Циля — Нельсена, Леффлера, Романовского — Гимзы, а также раствором Люголя, лактофуксином и другими красителями.

Современный контекст

Хотя классические методы окрашивания, описанные выше, остаются «золотым стандартом» и основой обучения в микробиологии, современная лабораторная диагностика всё шире использует молекулярные методы (например, ПЦР, секвенирование), иммунофлуоресценцию и автоматизированные системы идентификации. Однако микроскопия с окраской по-прежнему незаменима для быстрой первичной диагностики, оценки морфологии и принятия срочных клинических решений, особенно в условиях ограниченных ресурсов.